【2.4.4.4】AliCE

AliCE的全称为Antibody-Like Cell Engager。该双特异抗体的设计是以抗体的VH和VL形成的异源二聚体为基础。分别在VH和VL上连接Fab,形成新颖的2+1型双特异抗体(图4)。该抗体由韩国Y-BIOLOGICS公司和先进科技学院(KAIST)联合开发。

图4:AliCE双特异抗体结构示意图

AliCE双特异抗体由3条链共表达:ACE-HC-VL,ACE-HC-VL和ACE-LC。抗体的纯化利用CaptureSelectCH1-XL亲和层析柱纯化。SDS-PAGE结果证明,AliCE双抗在没有ACE-HC-VH链存在的情况下仅含有微量错配(图5C,第5泳道)。还原和非还原CE,质谱结果证明纯化后的抗体三条链的比为1:1:2没有存在错配(图5,D,E,F)。

图5:AliCE双抗设计表达及纯度和错配验证

稳定性方面,AliCE双抗体(ACE-05)的溶解温度在67°要高于BiTE的62°。并且抗体在室温下,不同PH溶剂中还保持很高的稳定性。

图6:AliCE双抗体稳定性

Ontarget 和Off target :体外细胞实验结果证明AliCE双抗ACE-05可以更好的结合PD-L1阳性的细胞,明显高于BiTE-05和ACE-31,而在结合PD-L1阴性细胞方面,ACE-05明显低于BiTE-05和ACE-31(图7A),这证明ACE-05双抗有较高的特异性。而且体外杀伤实验证明ACE-05有更好的疗效(图7D/E)。

图7:AliCE双抗On target 和Off target 验证

半衰期及体内药效 : 在动物实验上,ACE-05双特异抗体在抑制肿瘤生长方面要优于BiTE-05,并且小鼠体重变化明显小于BITE-05,这说明ACE-05双特异抗体不仅药效好而且有较小的副作用。 在半衰期方面,ACE-05在大鼠和猴子体内的半衰期分别为12.5h和31h,优于BITE的4.64h和9h。

图8:体内药效及半衰期

总结

AliCE为2+1形式的双特异抗体,与非对称IgG型双特异抗体相比,生产更加简单,一步亲和层析纯化后可以到达较高的纯度,在错配方面几乎观察不到错配分子。在稳定性方面,该双抗与IgG抗体类似,有较高的稳定性;关于亲和力和药效,该双抗因为可以包含两个肿瘤相关结合位点,因此比BiTE有更好的治疗效果;在Off target效应上,因为与CD3的结合结合能力较弱,因此副作用更小。依据该平台,Y-BIOLOGICS已经有两个项目正在开发中。

参考资料

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  • F-star 官网 https://www.f-star.com/
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