【1.6.3】实验--免疫细胞功能的测定

细胞免疫(cellular immunity)即细胞介导免疫(cell-mediated immunity, CMI)有广义和狭义之分。广义的细胞免疫指除 T 细胞介导的特异 性免疫外,还包括吞噬细胞、NK 细胞等的免疫作用。

实验一 中性粒细胞吞噬功能实验

[目的]

  1. 掌握中性粒细胞的吞噬作用原理和方法。
  2. 了解其他的吞噬功能的检查方法。

[原理]

吞噬作用(phagocytosis):是指细胞从周围环境摄取固体颗粒(如:微 生 物或较大的细胞残片)的活动。血液中的中性粒细胞是一种小吞噬细胞, 通过趋 化、调理、吞入和杀菌等步骤,能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原 微生物等异 物,是机体非特异性免疫的重要组成部分。

吞噬细胞(phagocyte):主要包括中性粒细胞(neutrophil)和单核吞噬 细 胞(mononuclear phagocyte)两类。分别称为小吞噬细胞和大吞噬细胞。

[材料]

  1. 无菌肉汤,白色葡萄球菌菌液,PBS 缓冲液,瑞姬氏染液。
  2. 2ml 注射器,解剖器材,玻片,显微镜等。

[方法]

  1. 诱导:实验前 1小时给小白鼠腹腔注射(头低位、曲形进针)无菌淀粉 肉汤 2ml,诱导浆液渗出(此步已完成)。
  2. 注射:给小白鼠腹腔内注射白葡菌液 1ml,轻揉腹部,让小白鼠活 动。
  3. 取样:注射后 30分钟处死小白鼠,抽取腹腔液涂片。
  4. 干燥:室温或者放温箱中完全干燥标本。
  5. 染色:
    1. 滴加 3~8 滴瑞姬氏染液 A液于标本上,以完全盖住标本为宜,染色 30~60秒。
    2. 滴加2~3倍体积的瑞姬氏染液 B液,用吸耳球吹打均匀。 3. 5分钟后甩去玻片上的染液,吸水纸吸干。
  6. 油镜下观察。

[实验结果]

油镜下见中性粒细胞胞浆呈淡兰色,核分叶、紫红深染,白色葡萄球菌 呈兰色。可见中性粒细胞胞浆内吞噬有很多白色葡萄球菌。

[注意事项]

  1. 注射菌液时不要注射到皮下或腹腔脏器,注射后轻揉腹部,以使液体在 腹 腔内分散均匀。
  2. 注意掌握好染色时间。

[思考题]

大、小吞噬细胞的区别?

附录:显微镜油镜的使用

1.油镜的识别: 油镜头上常刻有白色环圈,或标有“油”字、 “oil”、100/1.30 等。使用油镜可放大 1000 倍。

2.原理: 使用油镜观察时,需加香柏油,因为油镜需要进入镜头的光线多,但油镜的透气孔最小,这样进入的光线就少,物体不易看清楚。又因自 玻片透过的光线,由于介质(玻片-空气-接物镜)密度(玻片:n=1.52, 空气:n=1.0)不同而 发生了折射散光,因此射入镜头的光线就更少,物体 更看不清楚。采用一种和玻片折光率相接近的介质如香柏油,加于标本与玻 片之间,使光线不通过空气,这样射入镜头的光线就较多,物象就可看得清 楚。

3.使用方法: 先用低倍镜找到视野

a. 将光线调至最强程度(聚光器提高,光圈全部开放)。 
b. 转动粗调节器使载物台上升,滴香柏油 1 小滴(不要过多,不要涂
开) 于接物镜正下方标本上。
c. 转动接物镜转换盘,使油镜头于镜筒下方。 
d. 俯身镜旁侧面在肉眼的观察下,转动粗调节器使油镜头徐徐浸入香柏油
内,轻轻接触玻片为止。
e. 慢慢转动粗调节器,使载物台徐徐下降至见到标本的物象为止。 
f. 转动微调节器,使视野物象达到最清晰的程度。 
g. 左手徐徐移动推进器,并转动微调节器以观察标本。 
h. 标本观察完毕后,转动粗调节器将载物台下降,取下标本玻片。 最后用擦镜液将油镜头上的香柏油擦干净。

实验二 E花环形成实验(示教)

[目的]

掌握E花环形成实验原理和结果。

[原理]

CD2是人T细胞独特的表面标志。在一定的条件下,绵羊红细胞(SRBC) 与T细胞表面的CD2结合,使SRBC环绕在T细胞的周围,形成玫瑰花样的细胞 团。 本试验可作为人外周血 T细胞的鉴定和计数,同时作为人细胞免疫功能 状态的一个检测指标,也是分离 T细胞的常用方法之一。

[实验结果]

计数200个淋巴细胞,凡结合 3个SRBC以上者为E玫瑰花阳性细胞, 求出 百分率即为 T细胞百分比。正常值为 60~80%。

实验三 T淋巴细胞转化试验(示教)

[目的]

掌握T淋巴细胞转化实验原理和结果。

[原理]

淋巴细胞在体外培养时,当受到非特异刺激物如植物血凝素(PHA)、刀豆 蛋白A(ConA)、美洲商陆(PWM)等有丝分裂原刺激后,转化为淋巴母细胞, 淋巴母细胞具有特征性的形态变化。淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的 细胞免疫 水平,因此可作为测定机体免疫功能的指标之一。

[实验结果]

参考资料

  • 《医学免疫学》课件 新乡医学院 宋向凤、张国俊、徐春阳、孙爱平、孙书明、赵铁锁等老师
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