【1.6.4】实验--免疫标记技术

免疫标记技术(immunolabeling technique)是指用荧光素、酶、放射性同位 素等对抗体或抗原进行标记,然后再通过检测标记物来推断抗原抗体反应的实验 技术。

实验一 酶联免疫吸附技术(ELISA)–双抗体夹心法测定 AFP

[目的]

  1. 掌握酶联免疫吸附技术的基本原理。
  2. 熟悉双抗体夹心法测定甲胎蛋白(AFP)的方法。

[原理]

酶联免疫吸附技术(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)是一种 集 免疫学、生物化学及光学检测技术为一体的测定方法。将抗体固定化后,加 入标 本,再加入酶标抗体,形成抗体-抗原-抗体复合物,再加入酶反应的底物 后,底 物被酶催化形成产物,再加入显色剂即成为有色产物,产物颜色的深浅 与标本中 抗原物质的量呈正相关,由此进行定性或定量分析。

[材料]

  1. AFP 诊断试剂盒。
  2. AFP 阳性品,阴性对照品,待检品。
  3. 微量加样器,温箱。

[方法]

  1. 将包被孔编号,分别加入阳性对照、阴性对照及待测样品各 50ul。
  2. 在各孔内加入酶结合物 1滴,37°C温育 30分钟。
  3. 甩掉孔内液体,然后在各孔中分别加入洗涤液 1滴,摇匀,弃去,用蒸 馏 水或自来水加满各孔甩掉,反复 5次,然后在吸水纸上吸干(倒扣在吸水 纸上)。
  4. 各孔内加入底物和显色液各 1滴,轻轻摇动混匀,室温避光反应 2- 5min, 观察结果。

[实验结果]

  1. 若待检孔显色浅于或等于阴性对照孔则判定为阴性。
  2. 若待检孔显色深于或等于阳性对照孔则判定为阳性。
  3. 若待检孔显色介于阴性对照孔和阳性对照孔则判定为弱阳性。

[注意事项]

  1. 加样应加在加样孔的底部,避免产生气泡,防止产生假阴性。
  2. 洗涤必须彻底,防止产生假阳性。

[思考题]

  1. 免疫标记技术的特点是什么?
  2. 目前临床上 ELISA 实验用于哪些分子的检测?

实验二 免疫金标记技术 –妊娠诊断试纸检测 hCG

[实验目的]

掌握免疫金标记技术的基本原理和结果判定。

[实验原理]

免疫金标记技术(Immunogold labelling techique)是将金颗粒标记抗原或 抗体,用于检测相应抗体或抗原的一种实验方法。该技术主要利用了金颗粒具有 高电子密度的特性,在金标蛋白结合处,在显微镜下可见黑褐色颗粒,当这些标 记物在相应的配体处大量聚集时,肉眼可见红色或粉红色斑点,因而用于定性或 半定量的快速免疫检测。

####[实验器材]

早早孕检测试纸条,HCG 阴性对照品,待检品。

####[实验方法]

  1. 待测样品、检测试纸和其它检测材料等在室温后检测。
  2. 将测试纸有箭头的一端插入尿液标本容器中,5 秒钟后取出平放,5 分钟 内观察结果。

[实验结果]

  1. 阳性:在检测线位置和对照线位置各出现一条红色反应线。
  2. 阴性:仅在对照线位置出现一条红色反应线。
  3. 无效:测试纸无红色反应线出现,或仅在检测线位置出项一条反应线,表 明实验失败或测试纸失效。

[注意事项]

试纸条插入尿液深度不可超过 MAX标志线。

[思考题]

  1. 育龄妇女,停经 3天,早早孕试纸条检测阳性,临床上应首先考虑何种 情况?
  2. 流产后,早早孕试纸条检测阳性,临床上应首先考虑何种情况?

参考资料

  • 《医学免疫学》课件 新乡医学院 宋向凤、张国俊、徐春阳、孙爱平、孙书明、赵铁锁等老师
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