【4.7.3】免疫共沉淀技术(CoIP)

借助抗体和抗原之间的专一性,确定两种蛋白质在完整细胞内生理性的相互作用。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白,那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离,对B蛋白进行检测,进而证明两者间的相互作用。

优点:

① 常被用于鉴定特定蛋白复合物中未知的蛋白组分;

② 可分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

缺点:

① 可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白互作;

② 两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用,也可能出现假阳性的结果;

③ 对抗体选择和实验者操作技术要求较高。

参考资料

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