【1.8.1】常见的实验室大肠杆菌菌株

您一直在努力设计您的质粒—— 您为您的目标基因精心选择了最佳启动子,精心克隆到完美的空骨架中,确保为您的基因添加正确的标签,甚至可能在下游放置了荧光蛋白,由 IRES 元素分隔。你做了很多工作!但是让我们花点时间来认识一下您的原核小爪牙(minions),它们执行了复制新质粒的劳动密集型过程:大肠杆菌。

很难计算 目前可用的不同商业大肠杆菌菌株的数量—— 谷歌快速搜索表明有数百种。这仅包括设计用于亚克隆或蛋白质表达的一般实验室菌株。如果您要包括定制的菌株,则数量可能会达到数千个!本文的目的是为您提供足够的背景知识,以区分任何常见实验室菌株的特征,并确定它是否适合繁殖您的质粒或进行您的实验。

大肠杆菌历史

大肠杆菌是革兰氏阴性、杆状细菌,以西奥多·埃舍里希博士的名字命名, 他是 1885 年首次描述它们的科学家。大肠杆菌主要存在于动物的肠道中。有许多不同的天然大肠杆菌菌株,其中一些对人类是致命的。大多数常见的商业实验室大肠杆菌菌株今天使用的是两个单独的分离株,K-12 菌株和 B 菌株的后代。

  • K-12 于 1920 年从一名患者身上分离出来,最终导致了常见的实验室菌株 MG1655 及其衍生物 DH5alpha 和 DH10b(也称为 TOP10)。
  • 由于研究人员在历史上共享和重命名样本,B 菌株的历史有点复杂。它很可能在 1918 年被分离出来,但在 1942 年首次被称为“B 菌株”。BL21 菌株和衍生物是大肠杆菌B 菌株最常见的例子。

实验室中常用的 大肠杆菌菌株

您今天发现的大多数商业菌株都有特定用途:快速生长、高通量克隆、常规克隆、克隆不稳定的 DNA、制备未甲基化的 DNA 等等。大多数商业菌株中都存在许多使这些特征成为可能的突变,尤其是那些进行重大改进的突变,例如提高质粒产量和/或 DNA 质量的突变。下面的表 1 概述了在大肠杆菌菌株中发现的一些更常见的遗传变化。

表 1:在大肠杆菌 菌株中发现的常见基因突变

此外,表 2 提供了一些流行菌株、它们的基因型以及它们在实验室中的主要用途的快速参考。这些菌株均基于大肠杆菌K-12,被认为是 BSL-1。

其他资源

我们提供了常见实验室菌株的概述;然而,这些表格绝不是详尽无遗的! 如需更全面的列表和其他信息,请访问 OpenWetWare 的E.coli 基因型资源。此外,NEB 有大量 遗传标记供您参考。

浏览 Addgene 的细菌表达系统精选列表 。

参考资料

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