【4.7.2】酵母双杂交技术(Y2H)

酵母双杂交技术是将待研究的两种蛋白质分别克隆(融合)到酵母表达质粒的转录激活因子的DNA结合结构域(DNA-BD)和转录激活域(AD)上,通过2 个结构域的结合,从而调控目的基因的转录过程。这两个结构域分开时仍分别具有功能,但不能激活转录,只有当被分开的两者通过适当的途径在空间上较为接近时,才能重新呈现完整的转录因子活性,并可激活上游激活序列(upstream activating sequence,UAS)的下游启动子,使启动子下游基因得到转录。

优点:

① 操作简单,方便快捷,实验成本较低;

② 可快速、大量筛选蛋白互作组;

③ 灵敏度高,可检测存在于微弱或暂时蛋白相互作用。

缺点:

① 自身转录蛋白往往会造成假阳性的结果;

② 蛋白过量表达时对酵母产生毒性,使得酵母无法正常生长;

③ 无法检测细胞核外的蛋白互作。

参考资料

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