【5.1.1.2】CE-SDS

十二烷基硫酸钠( SDS) 是阴离子表面活性剂,可以断裂蛋白分子分子内和分子间的氢键、破坏其二级结构和三级结构使其伸展。虽与十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDSPAGE)法的电泳原理相同,CE-SDS 是液态胶在毛细管中按照分离量的大小进行蛋白的分离,自动化程度高,分离效率和重复性均优于SDS-PAGE[37]。在单抗类产品质量控制领域,CE-SDS 法已经基本取代了SDS-PAGE 法。

四、应用

《中华人民共和国药典》也将CESDS法作为单抗药物分子大小变异体的分析手段。根据样品处理过程中使用N-乙基顺丁烯二酰亚胺( NEM) 或β 巯基乙醇的不同,CE-SDS 法区分为非还原CE-SDS 法和还原CE-SDS 法( 使用β 巯基乙醇、二硫苏糖醇等还原剂进行样品处理) 。通过CESDS法分析可将目标成分和杂质有效分离,且能区分多批重组人源化PD-1 单抗产品间的细小差异,即CE-SDS 法适用于PD-1 单抗产品纯度和相关杂质的质控分析[30]。在应用CE-SDS 法分析抗CD52 单抗参比品单体纯度和非糖化重链比例时发现非还原CE-SDS 法测定单体纯度为93. 57%,还原CE-SDS法电泳重链修正峰面积为66.89%,CE-SDS 法测定抗CD52 单抗纯度及非糖化重链比例偏差小,结果准确可靠[38]。郭莎等[27]在对抗PD-L1 单抗的质量控制进行分析时证实还原CE-SDS 法的轻链与重链峰面积之和为( 98.37 ± 0. 21) %,非还原CE-SDS 法主峰峰面积为( 96.33 ± 0.15) %,CE-SDS 法可用于抗PD-L1 单抗纯度的质量控制。在采用CE-SDS 法分析HER2 单抗质量时也发现非还原CE-SDS 法检测的酸性异构体、预洗脱杂质、原液的主峰含量为90.83%,53.93%, 95.83%,小分子杂质含量分别为9.17%, 46.07%,4.17%,还原CE-SDS 法检测的酸性异构体、预洗脱杂质、原液的轻、重链百分含量分别为96.80%,78.00%, 98.85%,即CE-SDS 法可用于HER2 单抗的纯度分析[20]。非糖基化重链是抗体药物质量控制的关键参数,对抗体药物的体内外稳定性、半衰期等生物学活性起关键的作用,而CESDS法是目前唯一能够将抗体非糖基化重链与重链进行分离和进行准确定量的技术[39]。目前采用CE-SDS 法分析单抗药物纯度时采用的检测手段主要为紫外检测( UV 和PDA) 和激光诱导的荧光检测。与前者相比,激光诱导的荧光检测灵敏度高,可对痕量的蛋白质进行分析,而紫外检测器可消除背景胶中紫外吸收引起的基线波动,自动积分更准确[40-41]。为保证CE-SDS 法可靠稳定,研究人员采用了在毛细管两端增加相同的电压、反吸法移取凝胶溶液等手段提高CE-SDS 法的稳定性,并采用多通道毛细管电泳分析抗体药物纯度以提高检测的通量[42-43]。

参考资料

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