【5.1.1.4】毛细管凝胶电泳( capillary gel electrophoresis,CGE)

在毛细管电泳的多种分离模式中,CEZ法分析主要依靠分子量大小进行分离,cIEF 分析依靠单抗的等电点进行分离,而CEZ 法是依靠单抗类药物电荷/质量比进行分析,是最简单、最常用的毛细管电泳类型。

由于单抗类药物各个变异体之间的质量差别不大,主要变异来自氨基酸的翻译后修饰,具体体现在表面电荷的不同。CEZ 法的分离模式与cIEF 法相似,但前者比后者更简单、更便捷。CEZ法与质谱联用后可以依靠后者对毛细管电泳分离的电荷变异体进行结构分析。在对IgG2 型单抗电荷异质性进行毛细管区带电泳分析时证实CZE 法可以有效分离IgG2 单抗电荷异构体,精密度良好,峰面积RSD < 3. 0%,提示CZE 法可以对该类单克隆抗体的电荷异构体有效分离[53]。在对常用的单克隆抗体电荷异质性分析时证实IEC 法和CZE 法在检测的电荷异构体峰面积时结论基本一致,但二者与CIEF 法和iCIEF 法检测的抗体主峰等电点存在一定差异[38]。虽然CEZ 法操作简单便捷,但单抗类药物的多样性决定了没有任何一个分离条件能对所有的药物实现最佳的分离效果。在采用CZE 法分析单抗类药物的电荷异质性时,应综合考虑pH值、三乙烯四胺( TETA) 浓度、羟丙基甲基纤维素( HPMC) 或羟丙基纤维素( HPC) 等聚合物添加剂等因素。

参考资料

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