【5.2.3.3】柱层析设备

柱层析的基本原理是将一份蛋白质混合物分成很多小份,从而使某些组分中目标蛋白的浓度通过浓缩得以增大。虽然已经有很多昂贵和特殊的设备可用于柱层析,但实际上它只需要最基本的设备即可。

基本柱层析设备:

1、固定相:一种惰性介质, 通常带有一种可促进蛋白质相互作用的官能团以进行蛋白质分离。固定相和官能团的选择取决于层析色谱和方法的种类。

2、柱子:一种圆柱形玻璃容器,长度和直径各不相同。柱子可以直接购买已填装固定相能直接连接到层析设备上使用的预装柱,或可购买空柱自己手动填装。自动层析设备和人工重力柱使用的是不种类型的柱子。

3、溶剂:含有添加剂的缓冲液,作为将蛋白质在固定相上平衡和洗脱的流动相。不同类型的柱层析需要不同的溶液条件。

4、收集管:用于收集洗脱液样品的容器。自动组分收集器需要特定的收集管。手动收集时,则试管或容器均可使用。

5、纯度检测方法:一种检测样品里所有蛋白质中目标蛋白相对含量的检测手段。每一步获得的含有目标蛋白的组分都必须在进行下一步纯化工作前进行检测。后面的章节将对一些常用的纯度分析方法进行讨论。

层析系统

柱层析可以依赖用泵将溶剂以固定流速打入填装好的层析柱的自动设备来完成或者依靠流动相的重力作用自己完成。自动系统或者重力柱系统均可与自动组分收集器连接使用。

参考

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