【11.2.1】饱和突变(saturation mutagenesis)

点饱和突变技术是蛋白质工程中的一门新兴技术,它通过对目的蛋白的编码基因进行改 造,短时间内获取靶位点氨基酸分别被其它19种氨基酸替代的突变子。此技术不仅是蛋白质定 向改造的强有力工具,而且是蛋白质结构-功能关系研究的重要手段

上世纪70年代末,加拿大著名科学家Smith[1]发明了寡聚核苷酸定点突变技术,使蛋白质工程翻开了 新的一页,他也因此荣获了1993年度诺贝尔化学奖。 时至今日,定点突变( site-directed mutagenesis )作为一种理性设计方案仍被广泛应用于蛋白质改造中。尽管 定点突变技术的应用极大地推动了蛋白质工程技术的发展,但其仍面临着自身无法解决的难题———如何从 其它19种天然氨基酸中找到合适的替换者来突变靶位点。近来一系列研究表明,多点突变往往能获得比单点突变更为理想的进化子,多点突变是定点突变不易直接获得的。对于定点突变技术不能解决的这些问题,恰恰是点饱和突变技术的独特之处。

所谓点饱和突变技术( site-saturation mutagenesis),是通过对目的蛋白的编码基因进行改造,短时间内获取靶位点氨基酸分别被其它19种天然氨基酸所替代的突变子。它不是定点突变技术的简单延伸,而是蛋 白质设计理念的全面升华,广泛地应用于蛋白质改造及结构—功能关系研究中,并取得了一系列令人瞩目 的成绩。如利用点饱和突变技术鉴定蛋白质功能位点,提高酶比活力,改善酶热稳定性、底物结合 特异性及立体异构特异性等多方面性质。

常用的点饱和突变技术

  1. 寡核苷酸定向右边 ( oligonucleotide-directed mutagenesis )
  2. 盒式诱变 (cassette mutagenesis )
  3. 基于PCR的点饱和突变

参考资料

  • 《点饱和突变技术及其在蛋白质工程中的应用》
个人公众号,比较懒,很少更新,可以在上面提问题,如果回复不及时,可发邮件给我: tiehan@sina.cn

Sam avatar
About Sam
专注生物信息 专注转化医学