【1.5.2】外周血单个核细胞PBMC

外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)是外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞和单核细胞。注意这里是 mononuclear cell 单个核细胞,而不是 Monocyte 单核细胞。外周血单个核细胞主要的分离方法是Ficoll-hypaque(聚蔗糖-泛影葡胺)密度梯度离心法。

外周血单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。单个核细胞的体积、形态和比重与外周血其他细胞不同,红细胞和多核白细胞的比重在1.092左右,单个核细胞的比重为1.075-1.090,血小板为1.030-1.035。因此利用一种介于1.075-1.092之间而近于等渗的溶液作密度梯度离心,使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,可将各种血细胞与单个核细胞分离。

PBMC or 全血

究竟用全血还是PBMC做研究,实际上取决于你的研究目的是什么。如果检测红细胞或者血小板,当然要用全血。如果检测的是粒细胞,就直接裂解红细胞就可以。如果检测的是淋巴细胞或者单核细胞就要用PBMC。

那么为什么要裂解红细胞或者用PBMC呢?因为全血中红细胞和血小板加起来要占99%以上,这些细胞的存在对于抗体标记和流式分析都会产生很大的影响,很可能因此得到错误的结果。如果你检测的是淋巴细胞或者单核细胞,直接用全血测,得到结果一般是不被认可的,无法在文章上发表这类数据。那么什么是PBMC呢?

单细胞研究中,我们也经常使用PBMC样本,第一步就是要裂解红细胞。怎么样判断红细胞有没有裂解完全呢?一般我们会检查每个细胞中血红蛋白的含量,来判断是否为红细胞。在哺乳动如中,一般血红蛋白会占到整个红细胞干重的96%。常见的血红蛋白基因包括下表中的10个基因,分别是”HBA1”,“HBA2”,“HBB”,“HBD”,“HBE1”,“HBG1”,“HBG2”,“HBM”,“HBQ1”和”HBZ”。

参考资料

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