【3.7.2】DNA Tm

热变性使DNA分子双链解开所需的温度称为熔解温度（melting temperature，Tm）。DNA分子的热变性具有在很狭窄的温度范围内突发跃变的过程，很像结晶达到熔点时的熔化现象，故称熔解温度。当缓慢而均匀地增加DNA溶液的温度，记录各个不同温度下的A260值，即可绘制成DNA的变性曲线。典型DNA变性曲线呈S型。S型曲线下方平坦，表示DNA的氢键未被破坏；待加热到某一温度时，次级键突然断开，DNA迅速解链，同时伴随吸光率急剧上升；此后因“无链可解”而出现温度效应丧失的上方平坦段。当被测DNA的50%发生变性，即增色效应达到一半时的温度作为Tm。它在S型曲线上相当于吸光率增加的中点处所对应的横坐标。

DNA分子的变性温度主要取决于DNA自身的性质，这些性质包括：

（1）DNA的均一性。包括DNA分子中碱基组成的均一性以及DNA种类的均一性。总的来说，DNA均一性越大，Tm值范围较窄，反之亦然。

（2）DNA的GC含量。GC含量越高，Tm值越高。因为GC碱基对有3个氢键，而AT碱基对只有2个氢键，DNA中GC含量高显然更能增强结构的稳定性。Tm与GC含量的关系可用以下经验公式表示（DNA溶于0.2mol/L NaCl中）：Tm=69.3+0.41×(G+C)%。

参考资料

• 南京大学 杨荣武老师 《结构生物学》课件