【5.1.1.3】cIEF 和iCIEF

cIEF 和iCIEF 均属于毛细管电泳的范畴,在基于电荷的分离技术中其分辨率是最高的[44 - 45]。根据待分离物质等电点的不同,将其在pH 梯度内将酸碱两性物进行电泳分离,并最终在与物质等电点相等pH 值的位置聚集成条带。

单抗类产品生产过程中涉及糖基化、末端氨基酸改变、异构化、聚合、分裂等翻译后修饰,而这些修饰均会引起单抗表面电荷的改变,包括直接改变电荷的数目和间接引起构象的改变,即单抗类抗肿瘤药物的电荷异质性。在单抗类抗肿瘤产品质量控制过程中,cIEF 法和iCIEF`法主要用于分析产品的等电点和电荷异质性[46 -47]。在对重组抗肿瘤坏死因子α ( TNF-α) 全人源单抗分析时发现cIEF 法和iCIEF 法可用于主峰与酸性峰的比例分析,但二者检测抗体主峰等电点具有差异性,提示在实际应用时应结合单抗药物的特性和表征选择合适的电荷异质性分析方法[48]。刘振东等[49]建立了iCIEF 分析血管内皮生长因子受体-抗体Fc 融合蛋白的电荷异质性,发现iCIEF 法分离效果明显好于cIEF 和IEF,即iCIEF 法用于重组蛋白类药物电荷异质性及等电点快速、准确、重复性好,能够较好地检测高度糖基化的重组血管内皮生长因子受体-抗体Fc 融合蛋白产品的电荷异质性,保障了Fc-融合蛋白类产品生产工艺的稳定性,为该产品质量控制提供了快速、可靠的分析方法。在评价全柱成像毛细管电泳( capillary isoelectric focusing-whole column imaging detection,cIEF-WCID) 检测多肽类药物等电点的效果时,证实该方法可快速、准确地分析具有电荷异质性的多肽类产品的等电点,且能够跟踪聚焦过程中样本的迁移特征,对复杂电荷异质性蛋白类药物检测具有较好的分辨率和重复性[50]。美国药典36 版也收录了cIEF 作为单抗类药物曲妥珠单抗和利妥昔单抗的电荷异质性分析方法。除了单克隆抗体外,cIEF 也可以对抗体偶联药物( antibody-drug conjugate,ADC) 进行电荷异质性的分析[51-52]。

参考资料

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