【5.7.2.3】ELISPOT检测ASC

酶联免疫斑点法(enzyme linked immunospot assay, ELISPOT) ，作为一项新型的免疫酶技术，是从单细胞水平检测分泌抗体细胞(ASC) 或分泌细胞因子(CK) 细胞的一项细胞免疫学检测技术。由于该方法敏感性高，易操作，成本相对流式细胞分析术也较低，已被广泛用于分泌CK细胞检测或ASC测定中。

一、原理

细胞受到刺激后局部产生细胞因子，此细胞因子被特异单克隆抗体捕获，被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。 BCIP/NBT 底物孵育后， PVDF 孔板出现“紫色”的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过ELISPOT 酶联斑点分析系统对斑点的分析后得出结果。

从字面上来说，可以分解成两部分：“酶联免疫”与“斑点”。

一言以蔽之，ELISA 检测的是无生命的溶液中抗原分子的浓度，ELISPOT 检测的是有生物活性的活细胞分泌抗原的功能。

二、工作原理

A. 特异性单抗包被在培养孔底部；

B. 加入细胞及刺激物培养，阳性细胞开始分泌细胞因子，细胞因子就近被包被抗体捕获；

C. 移出细胞，板底留下自胞因子的潜在“影像”；

D. 加入酶标记的检测抗体，检测抗体和“影像”上的细胞因子结合，形成“抗体-抗原-抗体”夹心结构；

E. 加入显色底物，在酶的催化分解下，生成不可溶的色素，就近沉淀在局部的膜上形成斑点；

F. 斑点计数（可人工计数，也可用自动读板仪计数），数据处理，结果分析。

三、ELISPOT的优势

参考资料

• https://blog.csdn.net/Bio12345/article/details/118695606